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Produktformate für die Proteinreinigung

Die Proteinreinigung mittels Affinitätschromatographie basiert auf den Bindesaffinitäten zwischen verschiedenen Molekülen. Bei der Reinigung bindet das mit einem kurzen Peptid markierte Zielprotein an den Liganden, der in der Regel an ein Resin gekoppelt ist, während unerwünschte Proteine ohne Markierung nicht binden und weggewaschen werden können.

Das Resin kann aus Agarose oder magnetischen Beads bestehen. Beide werden in Form einer Suspension geliefert. Alternativ können Agarose-Beads auch in FPLC-, Gravity-flow- oder Zentrifugensäulen gepackt werden. Welches Format sich für Ihre Anwendung am besten eignet, hängt entweder von der gewünschten Ausbeute oder vom ursprünglichen Probenvolumen ab.

Die Wahl des Produktformats auf der Grundlage...

Ausbeute

Volumen der Probe

Choosing protein purification product format based on sample volume

Diese beiden Schemata sollen Ihnen bei der Wahl des richtigen Produktformats für die Proteinreinigung unter den vier gängigsten Formaten helfen: Säulen für FPLC/HPLC-Geräte, Gravity-flow-Säulen, magnetische Beads und Zentrifugen-Säulen. Bitte beachten Sie, dass die Empfehlung davon abhängt, ob Sie die erforderliche Ausbeute oder das Probenvolumen als Ausgangspunkt haben.

Produktformate im Detail

FPLC/HPLC-Säulen

Große Probenmengen können mit Hilfe von Säulen in automatisierten FPLC/HPLC-Geräten wie Äkta® gereinigt werden. FPLC-Säulen werden mit unterschiedlichen Resinvolumina geliefert und können in Reihe geschaltet werden, um die Bindekapazität zu erhöhen. Sie werden über standardmäßige 10-32-Anschlüsse an das Gerät angeschlossen.

  • Breite pH-Kompatibilität
  • Ausgezeichnete Druckstabilität
  • Hervorragende Proteinreinheit
  • Säulen mit 1 ml & 5 ml Säulenbettvolumen verfügbar

Produktvorteile:
  • Schneller Auftrag von großen Probenmengen
  • Vollständig automatisierte Proteinreinigung
  • Zeitersparnis: Kein Warten zwischen den Reinigungsschritten, da das Gerät selbstständig die richtigen Volumina an Puffer und Probe zuführt.
  • Aufzeichnung des kompletten Affinitätschromatographie-Protokolls, das Aufschluss über die Reinigungsqualität gibt
  • Reproduzierbare Reinigungsergebnisse durch vorher festgelegte, benutzerunabhängige Programmeinstellungen

Strep-Tactin®XT 4Flow® cartridge
FPLC-Säule zur Reinigung von Strep-tag®II- oder Twin-Strep-tag®-Fusionsproteinen
Strep-Tactin®XT 4Flow® high capacity FPLC column
FPLC-Säule zur Reinigung von Strep-tag®II- oder Twin-Strep-tag®-Fusionsproteinen
Strep-Tactin® 4Flow® high capacity cartridge
FPLC-Säule zur Aufreinigung von Strep-tag®II- oder Twin-Strep-tag®-Fusionsproteinen - Neues Produkt! Erhalten Sie 10% Einführungsrabatt* bis zum 31.12.24.
affinity chromatography columns for äkta
Thumbnail for connecting fplc column to an akta device video

Gravity-flow-Säulen

Gravity-flow-Säulen sind ideal für Proteinreinigungen mit mittlerer Ausbeute. Die Resinsuspensionen ermöglichen es Ihnen, Ihre eigenen Säulen je nach Bedarf zu packen, aber Sie können auch aus anderen Formaten, wie z. B. vorgepackten Säulen, wählen.

  • Optimiert für Säulen-Affinitätschromatographie
  • Eine Vielzahl unterschiedlicher Produktgrößen und Matrizen

Columns for protein purification

Prepacked columns

Strep-Tactin® Superflow® high capacity column
Gravity flow column to purify Strep-tag®II or Twin-Strep-tag® fusion proteins
Strep-Tactin®XT 4Flow® column
Gravity-flow-Säule zur Reinigung von Strep-tag®II- oder Twin-Strep-tag®-Fusionsproteinen
Strep-Tactin®XT 4Flow® high capacity column
Gravity-flow-Säule zur Reinigung von Strep-tag®II- oder Twin-Strep-tag®-Fusionsproteinen

Suspension

Strep-Tactin® MacroPrep® resin
50% suspension to purify Strep-tag®II or Twin-Strep-tag® fusion proteins
Strep-Tactin®XT 4Flow® high capacity resin
50%ige Suspension zur Reinigung von Strep-tag®II- oder Twin-Strep-tag®-Fusionsproteinen
Strep-Tactin®XT 4Flow® resin
50%ige Suspension zur Reinigung von Strep-tag®II- oder Twin-Strep-tag®-Fusionsproteinen
Strep-Tactin® 4Flow® high capacity resin
50% Aussetzung zur Reinigung von Strep-tag®II oder Twin-Strep-tag®-Fusionsproteinen - Neues Produkt! Erhalten Sie 10% Einführungsrabatt* bis zum 31.12.24.

Magnetische Beads

Magnetische Beads können für Batch-Reinigungen in Reaktionsgefäßen oder 96-Well-Platten verwendet werden, um Proteine in Pull-downs zu reinigen. Die Beads können einfach mit einem Magneten im Reaktionsgefäß fixiert  werden, so dass keine Zentrifugation notwendig ist und Sie sich keine Sorgen machen müssen, dass Zielprotein während der Pipettierschritte verloren geht oder die Reinheit beeinträchtigt wird.

  • Keine Zentrifugation
  • Abtrennung der Probe über Magnetseparator
  • Abfüllungen mit 2 ml oder 10 ml Suspension


Pull-down assay magnetic beads
MagStrep Strep-Tactin®XT beads
Magnetische Beads (5%ige Suspension) zur Reinigung von Strep-tag®II oder Twin-Strep-tag® Fusionsproteinen
MagStrep® Strep-Tactin® beads
Magnetische Beads (5%ige Suspension) zur Reinigung von biotinylierten Proteinen

Zentrifugensäulen

Wenn Sie mehrere kleine Proben parallel bearbeiten müssen, können Sie Zentrifugensäulen mit dem Resin Ihrer Wahl verwenden. Sie ermöglichen Ihnen die Batch-Reinigung mehrerer Proteine parallel in  einem einfachen Setup.

  • Kompatibel mit herkömmlichen 1,5 ml oder 2,0 ml Reaktionsgefäßen
  • Kaufen Sie ein gebrauchsfertiges Kit oder füllen Sie leere Zentrifugensäulen mit dem Resin Ihrer Wahl


Spin columns for protein purification
Strep-Tactin®XT 4Flow® Spin Column Kit
Für die Aufreinigung von Strep-tag®II and Twin-Strep-tag® getaggten Proteinen
Spin Columns
Für die schnelle Proteinreinigung mit Strep-Tactin®XT 4Flow® high capacity

Wiederverwendung des Resins

Strep-Tactin®- und Strep-Tactin®XT-Resins für die Proteinreinigung können  >10 Mal* ohne Leistungsverlust regeneriert und wiederverwendet werden. Die Aktivität des Resins kann leicht mit HABA überprüft werden. Die gelbe HABA-Lösung färbt sich nach der Bindung an die Biotin-Bindetaschen von Strep-Tactin® und Strep-Tactin®XT rot (Strep-Tactin®) bzw. orange (Strep-Tactin®XT), was anzeigt, dass das Resin vollständig regeneriert ist. Anschließend kann HABA durch Waschen mit 100 mM NaOH entfernt werden. Sobald die rote Farbe verschwunden ist und NaOH mit Buffer W aus der Säule gewaschen wurde, kann die Säule wiederverwendet werden. Wenn die Biotin-Bindetasche blockiert oder beschädigt ist, tritt keine Farbverschiebung auf und das Resin kann nicht wiederverwendet werden.

*unter idealen Bedingungen können >50 Regenerationszyklen durchgeführt werden

Resin specifications


 

Strep-Tactin® 

Strep-Tactin®XT

Matrix Superflow®  Sepharose® MacroPrep® 4Flow® MagStrep Strep-Tactin®XT beads
      (only available as 20 ml slurry)    
Binding capacity*/
Dynamic Binding capacity**
classic: 3 mg/ml resin* classic: 3 mg/ml resin* classic: 3 mg/ml resin* classic: 5 mg/ml resin** classic: 25.5 µg/µl resin*
  high capacity: 7.0 mg/ml resin**     high capacity: 14 mg/ml resin**  
Bead structure 6% agarose, crosslinked 4% agarose, crosslinked polymethacrylate 4% agarose, highly crosslinked magnetic core covered with 6% agarose, crosslinked
Bead size 60-160 µm, spherical 45-165 µm 50 µm 50-150 µm, spherical 30 μm (average), spherical
Exclusion limit 6 x 10Da ~3 x 107 Da 1 x 106 Da 3 x 107 Da not specified 
Recommended  flow rate 0.5-1 ml/min  gravity flow 0.5-1 ml/min  0.5-1 ml/min batch purification
pH range for protein binding 7-8 7-8 7-8 4-10 6-10
Max pressure 9.6 bar gravity flow 70 bar 3.5 bar batch purification
Storage 4 °C, do not freeze 4 °C, do not freeze 4 °C, do not freeze 4 °C, do not freeze 4 °C, do not freeze
Shipment RT RT RT RT RT
Eluent desthiobiotin
desthiobiotin
desthiobiotin
biotin biotin
Regeneration buffer Buffer R Buffer R Buffer R Buffer XT-R
0.1 M NaOH
0.1 M NaOH
Features and recommendations
  • Strep-Tactin® Superflow high capacity binds three to five times more protein in comparison to Strep-Tactin® Superflow
  • Can be used for the purification of biotinylated proteins
  • For average sized proteins (<90 kDa)
  • For proteins that are hard to elute from Strep-Tactin®XT resins, like proteins with multiple tags or multimers
  • Suitable for use in FPLC columns
  • For large proteins (>90 kDa)
  • Can be used for the purification of biotinylated proteins
  • For proteins that are hard to elute from Strep-Tactin®XT resins, like proteins with multiple tags ore multimers
  • Only suitable for gravity flow due to low pressure stability
  • Synthetic support
  • Reduced unspecific binding
  • Strep-Tactin®XT 4Flow® high capacity binds three to fove times more target protein compared to Strep-Tactin®XT 4Flow®
  • Applicable for all protein types, especially large (>90 kDa), low abundant and challenging proteins
  • Strep-Tactin®XT 4Flow is recommended for first time users of the Strep-tag® system
  • Optimized for Batch purification
  • Beads can be separated with a magnetic device, no centrifugation necessary
  • Suitable for purification in 96-well plates

* Max binding capacity for a Strep-tag® protein (30kDa).

** Dynamic binding capacity (DBC) was determined with mCherry-Twin-Strep-tag (30 kDa) under realistic operation conditions and shows the amount of protein which is bound until 10% of the protein is found in the flow through.

Spezifikationen für Harze


Ligand Strep-Tactin® Strep-Tactin®XT
Matrix 4Flow® high capacity 4Flow® 4Flow® high capacity MagStrep® Strep-Tactin®XT-Beads
Bindekapazität 20 mg/ml Resin* 11 mg/ml Resin* 31 mg/ml Resin* 42,5 mg/ml Beads*
Bead-Struktur 4% Agarose, hoch vernetzt 4% Agarose, hoch vernetzt 4% Agarose, hoch vernetzt Magnetkern bedeckt mit 6% Agarose, vernetzt
Größe der Beads 50-150 µm, kugelförmig 50-150 µm, kugelförmig 50-150 µm, kugelförmig 30 μm (Durchschnitt), kugelförmig
Ausschluss-grenze 3 x107 Da 3 x107 Da 3 x107 Da nicht angegeben
Empfohlenes Verfahren Gravity-flow, FPLC Gravity-flow, FPLC, Zentrifugation Gravity-flow, FPLC, Zentrifugation
Batch-Reinigung
pH-Bereich für die Proteinbindung 7-8 4-10 4-10 6-10
Maximaler Druck 3,5 bar 3,5 bar 3,5 bar  
Lagerung 2-8 °C, nicht einfrieren 2-8 °C, nicht einfrieren 2-8 °C, nicht einfrieren 2-8 °C, nicht einfrieren
Versand RT RT RT RT
Elutionsmittel Desthiobiotin  Biotin Biotin Biotin
Regenerationspuffer 100 mM NaOH Buffer XT-R
100 mM NaOH
Buffer XT-R
100 mM NaOH
100 mM NaOH
Aktivitätstest Buffer R (HABA) Buffer R  (HABA) Buffer R(HABA)  
Eigenschaften und Empfehlungen
  • Strep-Tactin® 4Flow® high capacity kombiniert eine niedrige Agarosekonzentration und Druckstabilität
  • Für Proteine, die nur schwer von Strep-Tactin®XT-Resin eluiert werden können, wie Proteine mit mehreren Tags oder Multimere
  • Anwendbar für Proteine aller Arten und Größen
  • Strep-Tactin®XT 4Flow® wird für Erstanwender des Strep-tag-Systems empfohlen
  • Anwendbar für alle Proteintypen und -größen, insbesondere für gering konzentrierte und schwierige Proteine
  • Strep-Tactin®XT4Flow® high capacity bindet drei- bis fünfmal mehr Zielprotein als Strep-Tactin®XT 4Flow®
  • Empfohlen für die Reinigung von gut exprimierten Proteinen oder für die Reinigung im großen Maßstab
  • Optimiert für Batch-Reinigung
  • magentische Beads können mit einem magnetischen Separator getrennt werden, keine Zentrifugation erforderlich
  • Geeignet für Hochdurchsatz-Reinigung in 96-Well-Platten

*bestimmt mit einem 50-kDa-Twin-Strep-tag-Fusionsprotein


Anwendungsbeispiel

Der Zellkulturüberstand von MEXi-293E-Zellen (24 ml) wurde mit 240 µg eines großen Proteins (130 kDa) versetzt, das C-terminal mit dem Twin-Strep-tag® markiert ist. Die Proteinreinigung erfolgte mit Strep-Tactin®XT 4Flow® (Gravity-flow-Säule, 0,2 ml). Nach dem Probenauftrag wurde die Säule mit 1x Buffer W gewaschen. Das Twin-Strep-tag-Protein wurde in drei Elutionsschritten mit 0,7, 1,5 und 0,8 CV 1x Buffer BXT eluiert. Die Reinigungsergebnisse wurden mittels SDS-PAGE (A) und Western Blot (B) analysiert. Beide zeigen einen Molekulargewichtsmarker (M*, Precision Plus Protein™ Unstained Protein Standards, Strep-tagged recombinant (BioRad), M** PageRuler™ Plus Prestained Protein Ladder (Thermo Fisher Scientific)), den ,mit Zielprotein versetzten Zellkulturüberstand (S), den Durchfluss (FT), die erste und fünfte Waschfraktion (W1 bzw. W5) und die Elutionsfraktionen (E1-E3). Für den Nachweis im Western Blot wurde Strep-Tactin® HRP eingesetzt (1:4000).