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Hochdurchsatz-Aufreinigung

Bevor ein bestimmtes Zielprotein ausgewählt und im Detail untersucht werden kann, muss eine große Anzahl von Proteinen in Hochdurchsatz-Screenings (HTS) untersucht werden. Um sich auf ihre Funktion ohne die Einflüsse der anderen im Organismus vorhandenen Moleküle zu konzentrieren, müssen diese Proteine gereinigt werden. Viele Hochdurchsatz-Reinigungsanwendungen erfordern teure Geräte und spezifisches technisches Wissen. Alternativ dazu können bekannte und bereits etablierte Methoden so skaliert werden, dass sie in Laboren jeder Größe durchgeführt werden können.

Ansatz für die Anwendung

Empfohlenes Produkt

Bindekapazität

Erforderliche Ausrüstung

Manuell

Zentrifugensäulen
Bis zu 600 µg Protein pro Säule Mikropipetten, Zentrifuge, Schüttler

Halbautomatisch

Magnetische Beads in 96-Well-Platte Ab 500 µg pro Well Magnetseparator, Mikropipetten, Mehrkanalpipetten oder Pipettierroboter, Mikroplattenschüttler

Automatisiert

IMCStips® Bis zu 50 µg pro Spitze Pipettier-Roboter

High-throughput applications product formats

Manuelle Anwendungen

Für Experimente in kleinem Maßstab mit einer begrenzten Anzahl von Proben können Zentrifugensäulen verwendet werden. Sie sind ein praktisches Werkzeug für kleine Probenmengen, die noch manuell gehandhabt werden können. Dabei ist die Anzahl der Proteine, die gleichzeitig schnell und effizient aufgereinigt werden können, flexibel. Ein Spin Column Kit mit allen notwendigen Komponenten für die Proteinaufreinigung sowie leere Zentrifugensäulen, die mit dem Resin der Wahl kombiniert werden können, sind bei IBA Lifesciences erhältlich.

Strep-Tactin®XT 4Flow® Spin Column Kit
Für die Aufreinigung von Strep-tag®II and Twin-Strep-tag® getaggten Proteinen
Spin Columns
Für die schnelle Proteinreinigung mit Strep-Tactin®XT 4Flow® high capacity

Halbautomatische Anwendungen

Magnetische Beads, wie z. B. MagStrep® Strep-Tactin®XT-Beads, können in einer 96-Well-Platte mit rundem Boden verwendet werden, was die gleichzeitige Aufreinigung von bis zu 96 Proben ermöglicht. In diesem Format kann die Anwendung immer noch manuell durchgeführt werden, aber auch der Einsatz von Pipettierrobotern ist möglich. Der magnetische Kern der Beads ermöglicht die Verwendung eines Magneten, um die Beads beim Entfernen des Überstands in den Vertiefungen zu fixieren, wodurch der Verlust von Beads verringert wird und eine Zentrifugation überflüssig ist.

MagStrep Strep-Tactin®XT beads
Magnetische Beads (5%ige Suspension) zur Reinigung von Strep-tag®II oder Twin-Strep-tag® Fusionsproteinen

Automatisierte Anwendungen

Für einen automatisierten Ansatz, der nur minimale manuelle Eingriffe erfordert, sind IMCStips® mit Strep-Tactin®XT-Resin erhältlich. Das Spitzenformat ermöglicht eine Affinitätsreinigung mit hohem Durchsatz und gleichbleibender Reproduzierbarkeit, was es für industrielle Anwender besonders attraktiv macht. Der Ansatz wird in der folgenden Application Note ausführlich beschrieben. Mehr über die automatisierte Aufreinigung von Proteinen mit IMCStips® erfahren Sie auf der IMCS-Website.

Protein purification with IMSCTips workflow

Arbeitsablauf bei der Proteinaufreinigung mit IMCStips®, die Strep-Tactin®XT-Harz enthalten

Analytische Hochdurchsatz-Screening-Anwendungen

Die identifizierten und gereinigten Proteine aus dem ersten Screening können anschließend mit Hilfe der Strep-tag®-Technologie weiter charakterisiert werden. Aufgrund der herausragend hohen Affinität des Twin-Strep-tag® zu Strep-Tactin®XT (pM-Bereich) ist Strep-Tactin®XT sehr gut für biomolekulare Interaktionsanalyse-Technologien wie Oberflächenplasmonenresonanz (SPR) oder Biolayer-Interferometrie (BLI) geeignet.

Strep-Tactin®XT BLI Coupling Kit
Beschichtung von BLI-Biosensoren mit Strep-Tactin®XT für die reversible Immobilisierung und Analyse von Twin-Strep-tag®-Proteinen.
Twin-Strep-tag® Capture Kit
Reversible Immobilisierung von Twin-Strep-tag®-Fusionsproteinen für die SPR-Analyse